【產品名稱】：25(OH)D3,兔25羥基維生素D3ELISA試劑盒

【檢測(ce)方法】：酶聯(lian)免疫法/酶免法(ELISA)

【產品性(xing)狀(zhuang)】：96T，盒(he)裝液體

【貯(zhu)    藏】：2-8°C

【有 效 期】：Elisa試劑(ji)盒二年(nian)，我公(gong)司Elisa試劑(ji)盒均為批次，可放心購(gou)買(mai)。

【主(zhu)要成(cheng)分(fen)】：酶標板(ban),試劑,標準品(pin)等。

【標    本(ben)】：血清(qing)/血漿/細(xi)胞(bao)培養(yang)上清(qing)液/組織勻漿/組織液/尿(niao)液/分泌物

【質量承諾(nuo)】：我(wo)(wo)們堅持對產品質量作不斷的(de)評估、創新和改善以(yi)確(que)保您(nin)對我(wo)(wo)們產品的(de)高度信任。

【待檢(jian)樣本】：體(ti)液(ye)、血(xue)清、血(xue)漿(jiang)(jiang)、細胞培養上清液(ye)、尿液(ye)、組(zu)織勻漿(jiang)(jiang)、心(xin)房水標(biao)本等

【樣品采集(ji)】：Elisa試劑盒收(shou)(shou)集(ji)標(biao)本(ben)前(qian)必須清楚要檢(jian)測的成份是否足夠穩定(ding)。對(dui)收(shou)(shou)集(ji)后當天(tian)進行檢(jian)測的標(biao)本(ben)，儲存在(zai)4℃備用，如有特殊(shu)原因需要周期收(shou)(shou)集(ji)標(biao)本(ben)，將標(biao)本(ben)及時(shi)(shi)分裝后放在(zai)-20℃或-70℃條件下保存。避免反(fan)復凍(dong)融(rong)。標(biao)本(ben)2-8℃可(ke)(ke)保存48小時(shi)(shi)，-20℃可(ke)(ke)保存1個月。-70℃可(ke)(ke)保存6個月。部分激素類標(biao)本(ben)需添(tian)加抑肽酶。

【保 質 期】：半(ban)年(六個月)

一(yi)、“25(OH)D3,兔25羥基維生素D3ELISA試劑盒”特點概述

1.專一(yi)性強。抗(kang)(kang)(kang)原與(yu)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)免(mian)疫反應(ying)是專一(yi)反應(ying)，而免(mian)疫酶技術以(yi)免(mian)疫反應(ying)為基礎，所(suo)檢測(ce)的(de)對(dui)象是抗(kang)(kang)(kang)原(或抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti))，使用的(de)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)除標記了酶以(yi)外，與(yu)普通(tong)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)免(mian)疫反應(ying)特(te)性并無多大差別。

2.靈敏度高。由于(yu)抗體(ti)(ti)聯結上了(le)酶，因(yin)此，借助于(yu)酶與(yu)底物的顯色反(fan)應，顯示抗原與(yu)抗體(ti)(ti)的結合，大(da)大(da)提高了(le)檢(jian)測(ce)的靈敏性，使檢(jian)測(ce)水(shui)平接(jie)近放射免疫測(ce)定(ding)法(fa)。

3.樣品易保存(cun)。經過酶反應顯(xian)示的(de)有(you)色產物(wu)大多比較穩定，因此(ci)有(you)利(li)于樣品的(de)保存(cun)。

4.結(jie)(jie)果(guo)易(yi)觀(guan)察(cha)。對檢測結(jie)(jie)果(guo)即可用肉眼(yan)觀(guan)察(cha)，又可用顯微(wei)鏡觀(guan)察(cha)，也可以用分光光度(du)計(ji)進行(xing)比色測定，還(huan)可用顯微(wei)鏡觀(guan)察(cha)。這是因為(wei)某些酶反應產物(wu)能使電子密度(du)發生改(gai)變(bian)，從而引起被(bei)檢測物(wu)的顯示。

5.可(ke)以定量測定。溶液中的抗原物質(zhi)，應用酶(mei)免吸附技術(shu)進行比色測定，依據(ju)光密度值的變化(hua)，可(ke)以定量。預(yu)計(ji)用細胞分光光度計(ji)可(ke)對(dui)組織內的抗原進行免疫酶(mei)技術(shu)的定量測定。

6.可(ke)以大規模測(ce)定(ding)樣品。如有成千上萬份樣品需要進行(xing)檢測(ce)，免疫(yi)酶技術都能在較短時間內完成。

7.儀器(qi)(qi)和試(shi)劑簡單。對免疫沒技術來說(shuo)，不(bu)(bu)需要熒光顯微鏡(jing)，也不(bu)(bu)需要測定放(fang)射性的特殊儀器(qi)(qi)，所用儀器(qi)(qi)及試(shi)劑均(jun)屬一般性儀器(qi)(qi)與試(shi)劑，普通(tong)實(shi)驗室及生產應用單位均(jun)易購置

6、*，質量(liang)保證，最大限度的節省實驗經費。

二、ELISA試劑盒檢測概述
    ELISA（酶聯接免疫吸附反應分析）是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。 由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。
實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務。
三、實驗過程：

1.  試(shi)劑準備(bei)：所有試(shi)劑都必須在使用(yong)前(qian)達到(dao)室溫，使用(yong)后請立即(ji)按照說明書(shu)要求(qiu)保存試(shi)劑。  實驗操作(zuo)中請使用(yong)一次性的吸頭，避免交叉污染。

2.   加樣(yang)：加樣(yang)或加試(shi)劑時(shi)(shi)，請注意在吸取標本 / 標準品(pin)，酶(mei)結合(he)物或底物時(shi)(shi)，*個孔與最后一個孔加樣(yang)之間的時(shi)(shi)間間隔(ge)如(ru)(ru)果太大，將會導致不同的 “預孵育(yu)"時(shi)(shi)間，從而明顯地影響到測量(liang)值的準確性及(ji)重復性。一次加樣(yang)時(shi)(shi)間(包括標準品(pin)及(ji)所有樣(yang)品(pin))控(kong)制在10分鐘內，如(ru)(ru)標本數量(liang)多，推薦使(shi)用多道移(yi)液器加樣(yang)。

3.   孵育(yu)：為防止樣(yang)品蒸發，試驗(yan)時(shi)將反應(ying)板放于鋪(pu)有(you)濕布的密閉(bi)盒內，酶(mei)標(biao)板加上蓋或(huo)覆膜，以避(bi)免液(ye)體蒸發；洗板后應(ying)盡快進行下步操作(zuo)，任何(he)時(shi)侯都(dou)應(ying)避(bi)免酶(mei)標(biao)板處于干(gan)燥狀態;同(tong)時(shi)應(ying)嚴格遵守給定的孵育(yu)時(shi)間(jian)和溫度。

4.   洗(xi)滌(di)：洗(xi)滌(di)過程中(zhong)反(fan)應孔中(zhong)殘留的(de)洗(xi)滌(di)液應在(zai)濾紙(zhi)上充(chong)分拍干，勿將(jiang)濾紙(zhi)直接放入反(fan)應孔中(zhong)吸水(shui)，同時要消除(chu)板(ban)底殘留的(de)液體(ti)(ti)和手(shou)指(zhi)印(yin)，避免影響最后的(de)酶標(biao)儀讀數(shu)。

四、常見問題解答

小編(bian)簡(jian)單整理了(le)5個問題，具體(ti)內容如下(xia)：

1、一個(ge)(ge)ELISA試劑盒(he)檢(jian)測幾(ji)個(ge)(ge)樣品？

小編(bian)自己在各大論(lun)壇看到最多的三個答案：

1）48T 可(ke)做42個樣本加(jia)6個標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)(xian)；96T 可(ke)做90個樣本加(jia)6個標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)(xian)

2）以(yi)96T試(shi)(shi)劑(ji)盒(he)(he)來算，定量的(de)試(shi)(shi)劑(ji)盒(he)(he)一(yi)般(ban)可以(yi)做90個左右的(de)樣品(pin)，定性的(de)試(shi)(shi)劑(ji)盒(he)(he)可以(yi)做94個左右的(de)樣品(pin)

3）96T的ELISA試劑盒，去除標(biao)準品(pin)復孔檢(jian)測，最多還能檢(jian)測80個標(biao)本；48T的最多30個樣本。

2、elisa試(shi)劑(ji)盒96T的能做檢測多少血清樣品？板能重復利用(yong)嗎？

96T，一般做(zuo)復孔(kong)的(de)話，做(zuo)標準曲線(xian)需要16個(ge)孔(kong)，剩下80個(ge)孔(kong)就(jiu)可以做(zuo)40個(ge)樣本。這個(ge)板(ban)不能重復利用(yong)。而且(qie)配套的(de)試劑也只是夠一塊板(ban)子用(yong)的(de)。

3、想請教一下，我想用elisa法(fa)測血清里的(de)一種抗(kang)原，查了資料，發(fa)現(xian)沒(mei)有現(xian)成的(de)試(shi)劑盒(he)用，現(xian)在就有2種備選(xuan)方案，一種是買抗(kang)體對(dui)自(zi)己包(bao)被(bei)（查了R&D等大公司都沒(mei)有可用于elisa的(de)單抗(kang)）。哪種比(bi)(bi)較好呢(ni)？自(zi)己包(bao)被(bei)的(de)會(hui)不(bu)會(hui)比(bi)(bi)國產的(de)試(shi)劑盒(he)可靠呢(ni)？

如果(guo)你覺得技術(shu)不錯有隊其他公司不放心(xin)，可(ke)以(yi)自(zi)己(ji)購買抗(kang)體對(dui)自(zi)己(ji)包(bao)(bao)被，這個就(jiu)是(shi)麻(ma)煩(fan)點，自(zi)己(ji)包(bao)(bao)被用著放心(xin)，舒心(xin)；

4、western 和ELISA 處理樣(yang)本有(you)何差(cha)別？

Western Blot 樣品制備(bei)要加蛋(dan)白(bai)(bai)裂解液（含有蛋(dan)白(bai)(bai)酶(mei)抑制劑），然后冰上研磨(mo)，收集(ji)于(yu)EP管，冰上裂解30min，4度12000rpm離心15min，取上清分(fen)裝，即得到蛋(dan)白(bai)(bai)樣品。建議(yi)直(zhi)接(jie)電泳，多余的-80保存。建議(yi)分(fen)裝的蛋(dan)白(bai)(bai)每支(zhi)略(lve)多于(yu)一(yi)次上樣量，一(yi)次性用(yong)完一(yi)支(zhi)，避免反復凍融。

ELISA樣(yang)(yang)品(pin)，直接腦組織冰上(shang)勻(yun)漿，收集于EP管(guan)，同上(shang)一樣(yang)(yang)離心，大約(yue)220-250ul每支分裝（因為ELISA上(shang)樣(yang)(yang)量基本(ben)都(dou)是每孔(kong)(kong)100ul，做復(fu)孔(kong)(kong)，每個樣(yang)(yang)品(pin)2孔(kong)(kong)，就需(xu)要(yao)(yao)200ul，為了(le)避免不夠2孔(kong)(kong)，分裝時要(yao)(yao)大于200ul每支），直接實驗。多余(yu)的-80保(bao)存，一樣(yang)(yang)避免反復(fu)凍融。

不過ELISA少量(liang)樣品進行預實驗，或者查(cha)閱文獻，看看大概(gai)組(zu)織(zhi)里有多高濃(nong)(nong)度(du)，選擇(ze)合(he)適的試劑(ji)(ji)盒(he)，測量(liang)范圍要與組(zu)織(zhi)濃(nong)(nong)度(du)相符。避免濃(nong)(nong)度(du)過高測量(liang)不準，或者濃(nong)(nong)度(du)過低，小于試劑(ji)(ji)盒(he)zui低可測濃(nong)(nong)度(du)。

5、Elisa試劑盒該買哪家公司的呢(ni)？

提出這個問題(ti)的朋(peng)友其(qi)實該打(da)，目前國(guo)際上各個品牌的試劑盒生廠商，都會有(you)其(qi)偏重點，像BIM、R&D等品牌在細胞因子(zi)方(fang)面的試劑盒就非常好，而其(qi)他(ta)牌子(zi)也一(yi)樣的。

Bender：粘附分(fen)子方(fang)面的試劑(ji)盒；

Cayman：花生四烯(xi)酸類產品的試劑盒；

Merck(Linco)：內分泌研究方面的試劑盒；