根據我公(gong)司技(ji)術員的總(zong)結了(le)解，不少客戶對一抗、二抗的選(xuan)擇方面(mian)(mian)甚是苦惱，您(nin)是否也正面(mian)(mian)對此(ci)問題而不知怎(zen)樣做呢？在今(jin)天的內容里，上(shang)海恒遠(yuan)重點分析。

    通常情況下，某一特定的實驗中可能同時有幾種二抗可供選擇，如何能選擇到該實驗的二抗，需要綜合以下幾個方面進行考慮：
    *、一抗的物種來源
    一抗(kang)(kang)(kang)是(shi)在什(shen)么(me)物(wu)種來源的，相應的二(er)抗(kang)(kang)(kang)也要是(shi)抗(kang)(kang)(kang)該物(wu)種的抗(kang)(kang)(kang)體。例如，如果(guo)一抗(kang)(kang)(kang)是(shi)在小鼠體內(nei)制備(bei)(bei)的，那(nei)么(me)你就應當選擇抗(kang)(kang)(kang)小鼠的二(er)抗(kang)(kang)(kang)，如果(guo)一抗(kang)(kang)(kang)是(shi)在兔體內(nei)制備(bei)(bei)的，那(nei)么(me)二(er)抗(kang)(kang)(kang)就應當是(shi)抗(kang)(kang)(kang)兔的抗(kang)(kang)(kang)體。至于二(er)抗(kang)(kang)(kang)本身是(shi)在什(shen)么(me)動物(wu)中制備(bei)(bei)的對二(er)抗(kang)(kang)(kang)的質量(liang)并無明顯的影響(xiang)。

第二、一抗是屬于哪個類或亞類
    二抗需(xu)與一抗的類(lei)別或亞類(lei)相匹配。這通常是針對單(dan)克隆(long)抗體而言。多(duo)克隆(long)抗體主要(yao)是IgG類(lei)免疫球蛋白，因此相應的二抗就是抗IgG抗體.

    單克隆抗(kang)(kang)體的類別及亞類通常(chang)會(hui)在產品列(lie)表中列(lie)出，如果你的一抗(kang)(kang)是小(xiao)鼠(shu)IgM，那么相應的二抗(kang)(kang)就應當是抗(kang)(kang)小(xiao)鼠(shu)IgM，或是抗(kang)(kang)小(xiao)鼠(shu)IgG抗(kang)(kang)體。

    如(ru)(ru)果單克隆一(yi)抗(kang)是小(xiao)鼠IgG的某一(yi)亞類(IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3)，那么(me)幾乎所有的抗(kang)小(xiao)鼠IgG都可以(yi)與之(zhi)結合，或者你(ni)也(ye)可以(yi)選擇(ze)專門針對這一(yi)亞類的二(er)抗(kang)，例如(ru)(ru)，如(ru)(ru)果你(ni)的一(yi)抗(kang)是小(xiao)鼠IgG1，那么(me)你(ni)可以(yi)選擇(ze)抗(kang)IgG1的二(er)抗(kang)，此種抗(kang)體在(zai)雙標記實驗中(zhong)尤(you)其適(shi)合。

    如果您不知道一(yi)抗是哪一(yi)類(lei)別(bie)或亞類(lei)，那么抗小鼠IgG是一(yi)個不錯(cuo)的選擇，因為此種抗體可(ke)以識別(bie)大多(duo)數類(lei)型的IgG免疫球蛋白。

下面總結了幾種具有不同特異性的二抗：
    針對整個(ge)抗(kang)(kang)體分子(H＋L)具(ju)有(you)特異性：如anti-IgG(H+L)，此類(lei)抗(kang)(kang)體既可(ke)以與(yu)(yu)抗(kang)(kang)體的重鏈結(jie)合(he)也可(ke)以與(yu)(yu)輕鏈結(jie)合(he)，即與(yu)(yu)抗(kang)(kang)體分子的 Fc，F(ab’)2/Fab部分均可(ke)反應(ying)(ying)，anti-IgG(H+L)也可(ke)以與(yu)(yu)其他免(mian)疫球(qiu)蛋(dan)白家族反應(ying)(ying)，因(yin)為所(suo)有(you)的免(mian)疫球(qiu)蛋(dan)白都具(ju)有(you)相同的輕鏈。

    針(zhen)對Fab片段具有特(te)異性：這類抗體與重鏈輕(qing)鏈均可以(yi)結(jie)合，由于它們可以(yi)與輕(qing)鏈反(fan)應，它們同時也已和(he)具有相(xiang)同輕(qing)鏈的(de)其(qi)他種(zhong)類的(de)免(mian)疫球(qiu)蛋(dan)白(bai)反(fan)應。

    這(zhe)(zhe)對Fc片段或重鏈具有特(te)(te)異(yi)(yi)性(xing)：這(zhe)(zhe)類抗體和重鏈的Fc部分反(fan)應(ying)，一次它們(men)是類別(bie)特(te)(te)異(yi)(yi)性(xing)的(即gamma鏈特(te)(te)異(yi)(yi)性(xing)抗體只與IgG反(fan)應(ying)，mu鏈特(te)(te)異(yi)(yi)性(xing)抗體只識別(bie)IgM，依此類推)。

    輕鏈(lian)特異(yi)性：與所有(you)類別(bie)的(de)抗(kang)體反應(ying)，因為(wei)所有(you)類別(bie)的(de)抗(kang)體均(jun)具(ju)有(you)相同的(de)lambda鏈(lian)或kappa鏈(lian)。

    經過吸附處(chu)理(li)的(de)(de)(de)(de)二抗：不同來源的(de)(de)(de)(de)免疫球蛋白含有相(xiang)似(si)的(de)(de)(de)(de)結(jie)構，抗一個物種(zhong)的(de)(de)(de)(de)抗體(ti)可(ke)能與其他物種(zhong)發生交叉(cha)反應，一次(ci)有些二抗經過了動(dong)物或(huo)人類IgG吸附處(chu)理(li)，以減少(shao)非(fei)特(te)異(yi)性背景。例(li)如，如果是小(xiao)鼠(shu)的(de)(de)(de)(de)組(zu)織或(huo)細胞，那(nei)么選擇經小(xiao)鼠(shu)血清或(huo)IgG吸附處(chu)理(li)過的(de)(de)(de)(de)二抗可(ke)以減少(shao)非(fei)特(te)異(yi)性結(jie)合(he)。但是此種(zhong)抗體(ti)識別表位的(de)(de)(de)(de)數量被(bei)大大減少(shao)。

         
    第三、選擇哪種形式的二抗，是整個IgG分子，F(ab’)2片段，還是Fab片段？整個IgG分子：此種抗體適用于多數情況。
    F(ab’)2片(pian)段(duan)：該種抗(kang)(kang)(kang)體(ti)是由兩個靠二硫鍵連(lian)接的(de)(de)用于結(jie)合(he)(he)抗(kang)(kang)(kang)原的(de)(de)Fab片(pian)段(duan)組(zu)成，這些(xie)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)用在特定的(de)(de)情(qing)況中，如需要(yao)避免抗(kang)(kang)(kang)體(ti)與具有Fc受體(ti)的(de)(de)細胞結(jie)合(he)(he)的(de)(de)情(qing)況。

    Fab片段：它們只有一個結合位點，一般用來封閉內源性免疫球蛋白。
第四、選用耦聯有哪種探針的二抗？
    一般來講，耦聯到二(er)(er)抗上(shang)的(de)探(tan)針主要(yao)有酶(mei)(mei)(辣(la)根過(guo)氧化(hua)酶(mei)(mei)HRP和堿性磷(lin)酸酶(mei)(mei)AP或其衍生(sheng)物APAAP，PAP)，熒光(guang)基團(FITC, RRX, TR, PE)和生(sheng)物素(su)。選用哪種探(tan)針的(de)二(er)(er)抗主要(yao)取決(jue)于(yu)具體的(de)實(shi)驗。對于(yu)western blot和ELISA，zui常用的(de)二(er)(er)抗是(shi)酶(mei)(mei)標二(er)(er)抗，而細胞(bao)或組織(zhi)標記(ji)(ji)實(shi)驗(細胞(bao)免疫(yi)化(hua)學，組織(zhi)免疫(yi)化(hua)學，流(liu)式(shi)細胞(bao)術)中通常使(shi)用熒光(guang)基團標記(ji)(ji)的(de)二(er)(er)抗，免疫(yi)組化(hua)中也可(ke)以使(shi)用辣(la)根過(guo)氧化(hua)酶(mei)(mei)或堿性磷(lin)酸酶(mei)(mei)標記(ji)(ji)的(de)二(er)(er)抗。如果想要(yao)更(geng)大(da)(da)程度的(de)放(fang)大(da)(da)檢測信號，可(ke)以使(shi)用biotin/avidin檢測系統。

第五、抗體的純度：
    親和(he)層析純(chun)化的(de)抗(kang)體(ti)一般更受人們歡迎，因為(wei)這(zhe)些(xie)產(chan)品(pin)的(de)純(chun)度(du)zui高(gao)，產(chan)生(sheng)的(de)非特異性背景zui少(shao)。但是有些(xie)情況下也(ye)要考慮到純(chun)化過(guo)程中損失的(de)IgG部分，因為(wei)其中含有親和(he)力很高(gao)的(de)抗(kang)體(ti)，尤(you)其是當(dang)目的(de)抗(kang)原存在的(de)量(liang)很小的(de)時候，高(gao)親和(he)性的(de)IgG部分就(jiu)顯得尤(you)為(wei)重要。