二核苷酸（CpG）酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒使(shi)用(yong)說明書

本(ben)試劑(ji)盒(he)僅供研究使用。  

使用(yong)目的：

本試劑盒用(yong)于(yu)測定樣本中二核苷(gan)酸（CpG）的含量。

實驗原理

本試劑盒應用酶(mei)聯免(mian)疫(yi)競爭法測定標本中二核(he)苷(gan)酸（CpG）水平。用(yong)純(chun)化(hua)的二核(he)苷(gan)酸(suan)（CpG）抗體包被(bei)微孔板(ban)，制(zhi)成固相抗體，往包(bao)被(bei)單抗(kang)的微孔中加(jia)入二核苷酸（CpG），和HRP標記(ji)的二核(he)苷(gan)酸（CpG）抗原，使它們(men)競爭結合(he)，經過(guo)che底(di)洗滌后(hou)加底物TMB顯色。樣(yang)本顏色的深淺和樣(yang)品中的二(er)核苷酸（CpG）的含量呈負相關。用酶標儀在450nm波長下測定(ding)吸光(guang)度（OD值(zhi)），通(tong)過標準(zhun)曲線計算(suan)樣品(pin)中二(er)核苷酸（CpG）的含量。  

試劑盒組成

標本要(yao)求 

1．標本處理：（1）水樣   采集后經 -20℃反復凍融三次，再經玻璃纖維過濾后，備查

（2）組織   樣品用丁醇(chun)：甲(jia)醇(chun)：水(5：25：70 V：V：V)抽提(ti)，或按相(xiang)關文獻(xian)提(ti)取進行，提(ti)取后(hou)應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biao)本(ben)放于-20℃保存(cun)，備查

2．不能檢測含NaN3的(de)樣品，因NaN3抑(yi)制辣根過(guo)氧化(hua)物酶的(de)（HRP）活(huo)性。

操作步驟(zou)

1. 加樣：分別設(she)標準孔(kong)、空(kong)白孔(kong)（空(kong)白對照孔(kong)不(bu)加樣品及(ji)酶(mei)標試劑，其余(yu)各步操作相同）、待測樣品孔。在(zai)酶標包被板上標準孔(kong)中(zhong)加50微升，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然(ran)后(hou)再加待測樣品(pin)10μl（樣品最(zui)終(zhong)稀(xi)釋度(du)為(wei)5倍(bei)）。加樣(yang)將樣(yang)品加于酶(mei)標板孔(kong)底部，盡(jin)量不觸(chu)及孔(kong)壁，輕輕晃動混勻。

2. 加酶(mei)：每孔加入酶(mei)標試劑50μl，空白孔除外。

3. 溫育：用封板(ban)膜封板(ban)后(hou)置37℃溫育(yu)60分(fen)鐘。   

4. 配液：將30倍濃縮洗(xi)滌(di)液(ye)用蒸餾水30倍稀釋(shi)后備用(yong)

5. 洗(xi)滌：小心(xin)揭掉封板膜，棄(qi)去液體(ti)，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此(ci)重(zhong)復(fu)5次(ci)，拍干。

6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯(xian)色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色(se)15分(fen)鐘.

7. 終(zhong)止(zhi)：每孔加終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止反應（此(ci)時(shi)藍色立(li)轉黃色）。

8. 測(ce)定(ding)：以空白孔(kong)調零，450nm波長依(yi)序測量各(ge)孔的吸光度(du)（OD值）。 測(ce)定應在加終止液后15分(fen)鐘以內進行。

計算

  以標準物(wu)的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標(biao)，在坐標(biao)紙上繪出標(biao)準曲線(xian)，根據樣品的(de)OD值由標準(zhun)曲線(xian)查出(chu)相應的濃(nong)度；再乘以稀(xi)釋(shi)倍數；或(huo)用標(biao)準物的濃度與OD值計算出標(biao)準曲線(xian)的直(zhi)線(xian)回歸(gui)方(fang)程(cheng)式，將(jiang)樣品的OD值代入方程式，計(ji)算出樣品濃度，再(zai)乘以稀釋(shi)倍數(shu)，即為樣(yang)品的實(shi)際(ji)濃度(du)。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可(ke)能會有結晶(jing)析出，稀釋時可在水浴中(zhong)加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物(wu)質含量過高(gao)（樣本OD值大于標準品孔(kong)第一孔(kong)的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍(bei)數（n倍）后再測定，計算時(shi)請(qing)最后乘(cheng)以總稀釋倍數（×n×5）。

5． 封板膜(mo)只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

檢測范圍：

50ng/L -2800ng/L

規格：

96份/盒

保存條(tiao)件及有效(xiao)期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月