大鼠糖化血紅蛋白（GHb）ELISA試劑盒使用(yong)說明書(shu)

本試(shi)劑盒(he)僅(jin)供研究使用。

檢測范(fan)圍：                            ;                                96T

35nmol/L - 1200nmol/L

使用目的：

本試(shi)劑盒用于測定(ding)全血樣本(ben)中(zhong)糖化血紅蛋白（GHb）含量。

實驗原理(li)

本試(shi)劑(ji)盒應用雙抗體夾心法測定標本中大(da)鼠糖化血紅(hong)蛋白（GHb）水平(ping)。用純化的大鼠糖化血(xue)紅蛋(dan)白（GHb）抗(kang)體(ti)包(bao)被微孔板，制成固相(xiang)抗(kang)體(ti)，往(wang)包(bao)被單抗(kang)的(de)微孔中依次加入糖化(hua)血紅蛋白（GHb），再與(yu)HRP標記的(de)糖(tang)化血紅(hong)蛋白（GHb）抗體(ti)結合(he)，形成(cheng)抗體(ti)-抗原(yuan)-酶(mei)標抗體復合物，經過(guo)che底洗(xi)滌后(hou)加底(di)物TMB顯色。TMB在HRP酶的(de)(de)(de)(de)催化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成藍色，并在酸的(de)(de)(de)(de)作用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成最終(zhong)的(de)(de)(de)(de)黃色。顏色的(de)(de)(de)(de)深淺(qian)和(he)樣(yang)品中的(de)(de)(de)(de)糖化血紅蛋白（GHb）呈(cheng)正(zheng)相關。用(yong)酶標儀在450nm波長下測定吸(xi)光度(du)（OD值(zhi)），通過標準曲線計算(suan)樣(yang)品中(zhong)大鼠糖化(hua)血紅蛋白（GHb）濃度。

操作步驟

1. 標準品(pin)的稀(xi)釋：本試劑盒提供原(yuan)倍(bei)標準品(pin)一(yi)支，用(yong)戶可(ke)按(an)照下列圖表在(zai)小(xiao)試管(guan)中(zhong)進行(xing)稀(xi)釋。

2. 加樣：分別設(she)空白孔（空白對(dui)照孔不(bu)加樣品(pin)及酶標(biao)試劑，其(qi)余(yu)各步(bu)操作(zuo)相同）、標(biao)準孔、待(dai)測樣品孔(kong)。在酶標包被板上(shang)標準(zhun)品準(zhun)確加樣50μl，待測樣品(pin)孔(kong)中先加(jia)樣品(pin)稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最(zui)終稀釋度為(wei)5倍）。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)于(yu)酶(mei)標板孔底部，盡量不(bu)觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板(ban)膜(mo)封板(ban)后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液：將30倍濃(nong)縮洗滌液用蒸餾水30倍(bei)稀釋后備用(yong)

5. 洗滌：小心揭(jie)掉(diao)封板膜，棄去液(ye)體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜(jing)置30秒(miao)后(hou)棄去，如此重(zhong)復5次，拍干(gan)。

6. 加(jia)酶：每孔加(jia)入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯(xian)色(se)：每孔先加入顯(xian)色(se)劑A50μl，再加入顯(xian)色劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混勻，37℃避(bi)光顯色10分鐘(zhong).

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止(zhi)反應（此(ci)時藍(lan)色立轉黃(huang)色）。

11. 測定：以空白(bai)孔調(diao)零，450nm波長(chang)依序(xu)測量各孔(kong)的吸光度（OD值）。 測定應在加(jia)終止(zhi)液(ye)后15分鐘以內進(jin)行。

保(bao)存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期(qi)：6個月