琥珀酸(suan)（SUCN）酶聯免疫分析(xi)（ELISA）試劑盒使用(yong)說(shuo)明書

本(ben)試(shi)劑盒僅供研究使用。   

使用目的：

本試劑盒用于測定樣本中琥(hu)珀(po)酸(suan)（SUCN）的含(han)量。

實(shi)驗原理

本(ben)試劑盒應(ying)用(yong)酶聯免疫競爭(zheng)法測定標本中琥珀(po)酸（SUCN）水平。用(yong)純(chun)化的琥珀(po)酸（SUCN）抗(kang)體(ti)包被(bei)微孔板，制(zhi)成固相抗體，往(wang)包被單抗(kang)的微孔中(zhong)加入琥(hu)珀酸（SUCN），和HRP標記(ji)的琥珀酸（SUCN）抗原，使它們競爭(zheng)結合，，經過che底洗滌后加底物TMB顯色。樣本(ben)顏色的深淺和樣(yang)品中(zhong)的琥珀酸（SUCN）的含量呈負相關。用酶標儀在(zai)450nm波(bo)長(chang)下測定(ding)吸光(guang)度（OD值），通過標準曲線計算樣品(pin)中(zhong)琥珀酸(suan)（SUCN）的含量。  

試劑盒組成

標本要求 

1．標(biao)本處(chu)理(li)：（1）水樣   采集后經 -20℃反復(fu)凍融三次，再經玻璃纖維過濾(lv)后，備查

（2）組織   樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相關文獻提取進行(xing)，提取后(hou)應盡(jin)快進行(xing)實(shi)驗。若不能馬上進行(xing)試驗，可(ke)將(jiang)標本放于(yu)-20℃保存，備(bei)查

2．不能檢(jian)測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根(gen)過(guo)氧化(hua)物(wu)酶的（HRP）活(huo)性(xing)。

操作步(bu)驟

1. 加(jia)樣：分別設(she)標(biao)準孔、空白孔（空白對照孔不加(jia)樣品及酶標(biao)試劑，其(qi)余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biao)包被板上(shang)標(biao)準孔中加50微升，待測樣(yang)品(pin)孔中(zhong)先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀釋液40μl，然(ran)后再加待測樣品10μl（樣品最(zui)終稀釋度為(wei)5倍）。加(jia)(jia)樣將(jiang)樣品加(jia)(jia)于(yu)酶標(biao)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)晃動混(hun)勻(yun)。

2. 加(jia)酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入酶(mei)標試劑(ji)50μl，空白孔除外(wai)。

3. 溫育：用(yong)封板(ban)膜封板(ban)后置37℃溫(wen)育60分(fen)鐘。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌(di)液用蒸餾(liu)水(shui)30倍稀釋后備用

5. 洗(xi)滌：小心揭掉封(feng)板膜，棄(qi)去液體，甩干，每孔(kong)加滿洗滌液，靜置(zhi)30秒后(hou)棄去，如此重復5次(ci)，拍干。

6. 顯(xian)色(se)：每孔先加(jia)入顯(xian)色(se)劑A50μl，再(zai)加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩(dang)混勻，37℃避光顯色(se)15分(fen)鐘(zhong).

7. 終止(zhi)：每孔加終止(zhi)液50μl，終(zhong)止反(fan)應（此時(shi)藍色(se)立轉黃(huang)色(se)）。

8. 測(ce)定：以空白(bai)孔調零，450nm波長依序測量各(ge)孔的吸(xi)光(guang)度（OD值）。 測(ce)定應在加終止(zhi)液后15分鐘以內進(jin)行。

計(ji)算

  以標(biao)準物的(de)濃度(du)為橫(heng)坐標(biao)，OD值為縱坐標(biao)，在坐標(biao)紙上繪出(chu)標(biao)準曲線，根據樣(yang)品的OD值由標(biao)準曲線查出相應的濃度；再乘以(yi)稀釋倍數；或(huo)用(yong)標準物(wu)的濃(nong)度(du)與OD值計算出標準曲線(xian)的直線(xian)回(hui)歸方(fang)程式，將樣品(pin)的OD值代入方(fang)程式，計(ji)算出樣品濃度，再乘以稀(xi)釋倍數，即為樣品(pin)的實際濃度。

注(zhu)意事(shi)項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后(hou)方可使用，酶標(biao)包被(bei)板開封后(hou)如未(wei)用完，板條(tiao)應裝入密封袋(dai)中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中(zhong)加溫助溶，洗(xi)滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用(yong)加樣器，并經常校對其(qi)準確(que)性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最(zui)好控制在5分鐘內，如標(biao)本數量多，推薦使(shi)用排(pai)槍加樣。

4． 請每次測(ce)定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本(ben)(ben)中待測(ce)物質含量過(guo)高（樣本(ben)(ben)OD值大于(yu)標(biao)準品孔第一孔的OD值），請(qing)先用(yong)樣品稀釋(shi)液稀釋(shi)一定倍數（n倍）后(hou)(hou)再測(ce)定，計(ji)算(suan)時請最后(hou)(hou)乘以(yi)總稀釋(shi)倍(bei)數（×n×5）。

5． 封(feng)板膜只(zhi)限一次(ci)性使用，以(yi)避免交(jiao)叉污染。

6．底(di)物請避光保(bao)存。

7．嚴格按照說明(ming)書的操作進行，試驗結(jie)果判(pan)定必須(xu)以(yi)酶標(biao)儀讀數(shu)為準.

8．所有(you)樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑(ji)不同批號(hao)組分不得混用。

檢測范圍：

10ng/L-500ng/L

規(gui)格(ge)：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試(shi)劑(ji)盒(he)保存：；2-8℃。

2．有效(xiao)期：6個月