本(ben)試(shi)劑盒僅供研究使用。

檢測范(fan)圍：                                                          96T

15ng/L -500ng/L

使用目的：

本(ben)試劑盒(he)用于(yu)測(ce)定(ding)樣(yang)本(ben)中髓過氧化物(wu)酶-DNA復合物(wu)（MPO-DNA）含量。

實驗原理

本試(shi)劑盒應用雙抗體(ti)夾心法測定標本(ben)中人(ren)髓過氧化物酶-DNA復合物（MPO-DNA）水平。用純化的人髓過氧(yang)化(hua)物酶-DNA復合(he)物（MPO-DNA）抗體包被(bei)(bei)微孔板，制成固相抗體，往包被(bei)(bei)單抗的微孔中依次加入髓(sui)過氧化物酶(mei)-DNA復合(he)物（MPO-DNA），再與HRP標(biao)記(ji)的髓過氧化物(wu)酶-DNA復合物(wu)（MPO-DNA）抗(kang)體結合，形成抗(kang)體-抗原-酶標(biao)抗體(ti)復合物，經過(guo)che底洗滌后加(jia)底物(wu)TMB顯色。TMB在(zai)HRP酶的(de)催化(hua)下(xia)轉化(hua)成藍色，并在(zai)酸的(de)作用下(xia)轉化(hua)成最(zui)終的(de)黃色。顏色的(de)深淺和樣品(pin)中的(de)髓過氧化物(wu)酶-DNA復合物（MPO-DNA）呈(cheng)正(zheng)相關。用酶標儀在450nm波(bo)長下(xia)測(ce)定吸光度(du)（OD值），通過(guo)標準曲線計(ji)算樣(yang)品中人髓(sui)過氧(yang)化物酶-DNA復合物（MPO-DNA）濃度。

試劑(ji)盒(he)組成(cheng)

標本要求 

1．標本(ben)采集后盡早進行(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相關文獻進行(xing)，提(ti)取(qu)后應(ying)盡快(kuai)進行(xing)實驗。若(ruo)不能馬上(shang)進行(xing)試驗，可將標本(ben)放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測(ce)含NaN3的樣(yang)品，因NaN3抑(yi)制辣根過氧化物酶(mei)的（HRP）活(huo)性。

操作(zuo)步驟(zou)

1. 標準(zhun)品(pin)的稀釋：本試(shi)劑盒提供(gong)原倍標準(zhun)品(pin)一支，用戶可按(an)照下列圖(tu)表在小試(shi)管中進(jin)行(xing)稀釋。

2. 加(jia)樣：分別設空白(bai)孔(kong)（空白(bai)對照孔(kong)不(bu)加(jia)樣品及(ji)酶標試(shi)劑(ji)，其(qi)余各步(bu)操作相同）、標準孔(kong)、待測樣品孔。在酶(mei)標包被(bei)板上標準品準確加樣50μl，待(dai)測樣品孔中先加(jia)樣品稀(xi)釋液40μl，然(ran)后再加待測樣(yang)品10μl（樣品(pin)最終稀釋度為(wei)5倍）。加樣將樣品(pin)加于酶標板孔(kong)底部，盡量不觸及孔(kong)壁，輕輕晃動(dong)混勻。

3. 溫育：用封板膜(mo)封板后置37℃溫育30分(fen)鐘。   

4. 配液：將30倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗滌液用蒸餾(liu)水30倍稀釋(shi)后備用

5. 洗滌：小心(xin)揭(jie)掉(diao)封(feng)板膜，棄去液(ye)體(ti)，甩干，每(mei)孔加滿洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置(zhi)30秒后棄去，如此重復5次，拍(pai)干。

6. 加酶(mei)：每孔加入(ru)酶(mei)標試劑(ji)50μl，空白(bai)孔除外(wai)。

7. 溫(wen)育：操作同3。

8. 洗滌：操(cao)作同5。

9. 顯色(se)：每孔先加入顯色(se)劑A50μl，再加入顯色劑(ji)B50μl，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10. 終(zhong)止：每孔加終(zhong)止液(ye)50μl，終止(zhi)反應（此時藍(lan)色(se)立轉(zhuan)黃色(se)）。

11. 測定：以(yi)空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(du)（OD值(zhi)）。 測定應在加終止液后15分鐘以(yi)內進行。

保存條件(jian)及有效(xiao)期

1．試劑(ji)盒(he)保存(cun)：；2-8℃。

2．有效期：6個月