人(ren)細胞色素P450家族成員(yuan)1A1(CYP1A1)ELISA試劑(ji)盒使用說明(ming)書

本試劑盒僅供研究使(shi)用。

檢測范圍：     ;                                                     96T

3.5pmol/L - 160pmol/L

使(shi)用目的(de)：

本試劑盒(he)用(yong)于測定樣本中(zhong)細胞色(se)素P450家族(zu)成員(yuan)1A1(CYP1A1)含量(liang)。

實驗原理(li)

本(ben)試劑盒應用雙抗體(ti)夾心法(fa)測定標(biao)本(ben)中人細胞色(se)素P450家族成員1A1(CYP1A1)水平。用純(chun)化的人細胞色(se)素P450家族成員1A1(CYP1A1)抗(kang)體(ti)包被(bei)微孔(kong)板(ban)，制成固(gu)相抗(kang)體(ti)，往包被(bei)單抗(kang)的微孔(kong)中依次(ci)加入細胞色素P450家族成員1A1(CYP1A1)，再與HRP標記的細胞色素P450家族成員(yuan)1A1(CYP1A1)抗體(ti)結合，形(xing)成抗體(ti)-抗原(yuan)-酶標抗體復合物，經過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuan)(zhuan)化成藍色，并在酸的作(zuo)用下轉(zhuan)(zhuan)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細胞色素P450家(jia)族成(cheng)員(yuan)1A1(CYP1A1)呈正(zheng)相關。用酶標儀在450nm波長下測(ce)定吸光(guang)度（OD值），通過標準曲線計(ji)算樣品中人細胞色(se)素P450家族成員1A1(CYP1A1)濃度。

標(biao)本(ben)要求 

1．標本采集后(hou)盡(jin)早進行提(ti)(ti)取，提(ti)(ti)取按相關文獻進行，提(ti)(ti)取后(hou)應盡(jin)快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保(bao)存，但應(ying)避免反復(fu)凍融

2．不能(neng)檢(jian)測(ce)含NaN3的樣品，因(yin)NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操(cao)作(zuo)步驟

1. 標準品的稀(xi)釋：本試劑(ji)盒提供原倍標準品一支(zhi)，用戶可按(an)照下列圖表在(zai)小試管中進行稀(xi)釋。

2. 加(jia)樣：分別(bie)設空白孔(kong)(kong)（空白對照孔(kong)(kong)不加(jia)樣品及酶標試劑，其(qi)余各步操作相同(tong)）、標準孔(kong)(kong)、待測樣品孔。在酶標包(bao)被板上標準(zhun)品準(zhun)確加樣50μl，待測(ce)樣(yang)品孔中先加樣(yang)品稀(xi)釋液40μl，然(ran)后再(zai)加待(dai)測樣品10μl（樣品最終(zhong)稀釋(shi)度(du)為5倍）。加(jia)樣將樣品(pin)加(jia)于(yu)酶標(biao)板孔底部，盡(jin)量不觸及孔壁，輕輕晃(huang)動(dong)混勻。

3. 溫(wen)育：用封板膜(mo)封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液：將30倍(bei)濃縮洗滌液(ye)用蒸餾水(shui)30倍稀(xi)釋后(hou)備用(yong)

5. 洗(xi)滌(di)：小心揭掉(diao)封板膜，棄去(qu)液(ye)體(ti)，甩干，每孔加滿洗滌液(ye)，靜置30秒后(hou)棄去，如此重(zhong)復5次，拍干。

6. 加(jia)(jia)酶：每孔(kong)加(jia)(jia)入酶標(biao)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫(wen)育：操(cao)作(zuo)同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色(se)(se)：每(mei)孔先(xian)加入顯色(se)(se)劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避(bi)光(guang)顯色10分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終(zhong)止反應（此時藍(lan)色立轉黃色）。

11. 測定：以空(kong)白孔調零，450nm波(bo)長依(yi)序測量各孔(kong)的吸光度（OD值(zhi)）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

注(zhu)意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫(wen)助(zhu)溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同(tong)時做標(biao)準曲線，最好做復孔。如標(biao)本中(zhong)待測物質含量過高（樣本OD值大于標準(zhun)品(pin)孔第一孔的OD值），請先用(yong)樣品稀釋液稀釋一(yi)定倍數（n倍）后再測定(ding)，計(ji)算時請(qing)最后乘以總(zong)稀(xi)釋倍數（×n×5）。

5． 封板(ban)膜只限一次(ci)性使用，以(yi)避(bi)免交叉污(wu)染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及(ji)有效(xiao)期(qi)

1．試(shi)劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月