注   意 ：正式(shi)測定前(qian)務必取2-3個預(yu)期差異(yi)較大的樣本做預(yu)測定

測定意義：

測(ce)定對象中(zhong)各種抗(kang)氧(yang)化物質和抗(kang)氧(yang)化酶等構成總(zong)抗(kang)氧(yang)化水平。在生物學(xue)、醫學(xue)和藥(yao)學(xue)研究中(zhong)常(chang)常(chang)檢測(ce)血漿(jiang)、血清、唾液、尿液等各種體(ti)液，細胞或(huo)組織等裂(lie)解(jie)液、植物或(huo)中(zhong)草藥(yao)抽提(ti)液及各種抗(kang)氧(yang)化物(antioxidant)溶液的總抗(kang)氧化能力。

測定原理：

在酸性環境下，抗氧化物質還(huan)原 Fe³⁺-三(san)吡啶三(san)吖嗪(qin)(Fe³⁺-TPTZ)產生藍(lan)色(se)的 Fe²⁺-TPTZ 的能(neng)力反映了總抗氧(yang)化(hua)能(neng)力。

自備實驗用品：

恒溫水浴(yu)鍋、低溫離心機、酶標儀、96 孔板(ban)和蒸餾(liu)水(shui)。

試劑(ji)組成和配(pei)制：

提取液：液體 120mL×1 瓶，使用(yong)前預冷。

試劑一：液(ye)體 20 mL×1  瓶，避光保存(cun)。

試劑(ji)二：液體 2 mL×1 瓶，4℃避(bi)光保(bao)存。

試劑三：液體 2 mL×1 瓶，避(bi)光保存。

混合液(ye)(現(xian)配現(xian)用)：將(jiang)試劑一、試劑二(er)、試劑三按 10:1:1 的比例混合，使用前(qian) 37℃預溫。

樣品的制備：

(1)血清、血漿、唾液(ye)或(huo)尿(niao)液(ye)等(deng)液(ye)體樣品

血漿(jiang)（制備時可以使用肝素或檸(ning)檬酸鈉抗凝，不(bu)宜使用 EDTA   抗凝(ning)）4℃，5000rpm  離心10min，取上清待(dai)測。血清、唾液(ye)或尿(niao)液(ye)樣品直接用于測定，也可以-80℃凍(dong)存（不宜超過(guo)30 d）后再測定。

(2)組織樣品

按照組織(zhi)質(zhi)量（g）：提取液體積(ji)(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組(zu)織，加入 1mL提取液）進行(xing)冰浴勻漿，然(ran)后 10000g，4℃離心 10min，取上(shang)(shang)清，置冰上(shang)(shang)待測。

(3)細胞樣(yang)品

按照細胞數量(liang)（10⁴ 個）：提取液體積（mL）為(wei) 500~1000：1 的比例（建議(yi) 500 萬(wan)細(xi)胞加入1mL 提取(qu)(qu)液(ye)），冰浴(yu)超(chao)聲波破碎（功率 200W，超(chao)聲 3s，間(jian)隔 10s，重復(fu) 30 次）；10000g，4℃離心 10min，取(qu)(qu)上清(qing)，置冰上待(dai)測(ce)。

操作步驟(zou)：

1、酶標儀預熱 30min，調節(jie)波長至 593nm。

2、操(cao)作(zuo)表

注意(yi)：空白管只需測(ce)定(ding)一次，若測(ce)定(ding)管吸光(guang)值大于 1.5 則(ze)需(xu)要用提取液稀釋。