注   意 ：正(zheng)式測(ce)定前務必(bi)取(qu)2-3個(ge)預(yu)(yu)期(qi)差異較大的樣本做預(yu)(yu)測定

研究意義：

測定(ding)對象中各(ge)種(zhong)抗(kang)氧(yang)(yang)化物(wu)質和(he)抗(kang)氧(yang)(yang)化酶等(deng)(deng)構成(cheng)總(zong)抗(kang)氧(yang)(yang)化水平。在生物(wu)學(xue)、醫學(xue)和(he)藥學(xue)研究中常(chang)常(chang)檢測血(xue)漿(jiang)、血(xue)清、唾液(ye)(ye)、尿液(ye)(ye)等(deng)(deng)各(ge)種(zhong)體液(ye)(ye)，細胞或組(zu)織等(deng)(deng)裂解液(ye)(ye)、植(zhi)物(wu)或中草藥抽提液(ye)(ye)及各(ge)種(zhong)抗(kang)氧(yang)(yang)化物(wu)(antioxidant)溶(rong)液(ye)的總抗氧化能力。

測定原(yuan)理：

DPPH·為穩定(ding)的自(zi)由基 ，溶(rong)于甲醇，乙醇等極性溶(rong)劑中，在 515nm 處有最(zui)大(da)吸收。向DPPH·溶液(ye)中加入抗氧化劑時(shi)，會發生脫色反應，因此可用吸光度的(de)變化并以 Trolox 作為對照體(ti)系(xi)量化抗(kang)氧化物質的抗(kang)氧化能(neng)力(li)。

自備(bei)實驗(yan)用品(pin)：

恒溫水浴鍋、低溫離心機、酶標儀、96 孔板(ban)和蒸餾水。

試劑組成(cheng)和配(pei)制(zhi)：

提(ti)取液(ye)：液(ye)體 120mL×1 瓶，使(shi)用(yong)前預冷。

試劑(ji)一：液體 45mL×1  瓶，避光(guang)保存。

樣品的制備：

(1) 血(xue)清、血(xue)漿、唾液或尿液等液體樣(yang)品

血漿（制(zhi)備時可以(yi)使(shi)用(yong)肝素或檸檬(meng)酸鈉抗凝，不宜使(shi)用(yong) EDTA   抗凝）4℃，5000rpm  離心(xin)10min，取上清待測。血清、唾液(ye)(ye)或(huo)尿液(ye)(ye)樣(yang)品直接用于測定(ding)，也可以-80℃凍存（不宜超(chao)過30 d）后再測定。

(2) 組(zu)織樣(yang)品

按照(zhao)組(zu)織質量（g）：提(ti)取液體積(mL)為 1：5~10 的(de)比例(li)（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液(ye)）進行(xing)冰(bing)浴(yu)勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

(3) 細胞樣(yang)品(pin)

按照細胞數(shu)量（10⁴ 個）：提取液體積（mL）為(wei) 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xi)胞加(jia)入1mL 提取液），冰(bing)浴超聲(sheng)波破碎（功率(lv) 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次(ci)）；10000g，4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)，置冰(bing)上(shang)待測。

操(cao)作步驟：

1、酶標(biao)儀預熱 30min，調節波(bo)長至 515nm。

2、操作(zuo)表（在 EP 管中反應）

注意：空白管只需測定一次，若A_測定(ding)小于 0.2，需用(yong)提取液(ye)稀釋后(hou)檢測。