注   意 ：正式測定前務必取2-3個預(yu)期差異較大的(de)樣本做預(yu)測定

研(yan)究(jiu)意義：

測定對(dui)象中各(ge)種(zhong)抗(kang)氧(yang)化(hua)(hua)物質和(he)抗(kang)氧(yang)化(hua)(hua)酶等(deng)構成總抗(kang)氧(yang)化(hua)(hua)水平。在(zai)生物學、醫學和(he)藥學研究中常常檢測血漿、血清、唾液(ye)、尿(niao)液(ye)等(deng)各(ge)種(zhong)體液(ye)，細胞或(huo)組織等(deng)裂解液(ye)、植物或(huo)中草(cao)藥抽提(ti)液(ye)及各(ge)種(zhong)抗(kang)氧(yang)化(hua)(hua)物(antioxidant)溶液的總抗氧(yang)化(hua)能力。

總抗(kang)氧化(hua)能力(T-AOC）試(shi)劑盒 (ABTS法)測定原理(li)：

ABTS 法(fa)是使(shi)用(yong)zui廣(guang)泛的(de)間接(jie)檢測(ce)方法(fa)，可用(yong)于親(qin)水性(xing)和(he)親(qin)脂(zhi)性(xing)物質抗氧(yang)化(hua)能力測(ce)定。ABTS 經氧化后(hou)穩定的(de)藍綠(lv)色陽離子(zi)自由基 ABTS⁺，能溶于水相(xiang)或(huo)酸性乙醇介質中，在 734nm處(chu)有最大吸(xi)收。被測物質(zhi)加入 ABTS⁺溶(rong)液后，所(suo)含(han)抗氧化成分能與 ABTS⁺發(fa)生反(fan)應而使反(fan)應體(ti)系褪(tun)色。在 734nm 檢測吸光度(du)的(de)變化，并以 Trolox 作為對(dui)照體系量化抗(kang)氧(yang)化物(wu)質的抗(kang)氧(yang)化能力。

自備實驗(yan)用(yong)品：

恒溫水浴鍋、低溫離心(xin)機、酶(mei)標儀、96 孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體 120mL×1  瓶，4℃保存(cun)。

試(shi)劑(ji)一：液體 30mL×1 瓶，4℃避(bi)光保存。

試劑(ji)二：粉劑(ji)×2 瓶，4℃避光(guang)保存。

樣品的制備(bei)：

(1) 血清、血漿、唾(tuo)液(ye)或尿液(ye)等(deng)液(ye)體樣品(pin)

血漿（制(zhi)備時可以(yi)使(shi)用(yong)肝(gan)素或檸檬酸鈉抗凝，不(bu)宜使(shi)用(yong) EDTA抗凝）4℃，5000rpm 離(li)心10min，取上清待測(ce)。血清、唾液(ye)或(huo)尿液(ye)樣品(pin)直接用于測(ce)定，也可以-80℃凍存（不宜超過30 d）后再測定(ding)。

(2) 組織樣(yang)品

按(an)照組(zu)織質量（g）：提取液(ye)體積(mL)為 1：5~10 的比例（建(jian)議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL提(ti)取液）進行(xing)冰浴(yu)勻漿，然后 10000g，4℃離心(xin) 10min，取上清，置冰上待測。

(3) 細胞樣品

按照細胞數量（10⁴ 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wan)細(xi)胞加入(ru)1mL 提取液），冰浴(yu)超(chao)聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重(zhong)復(fu) 30 次(ci)）；10000g，4℃離心 10min，取(qu)上(shang)清，置冰上(shang)待測。

操作步驟(zou)：

1、 酶標儀預(yu)熱 30min，調節波(bo)長至 734nm。

2、 工作液(ye)的配置：臨用前取試劑二一瓶，加入 11mL 試(shi)劑一(yi)，震(zhen)蕩(dang)混勻 20min 后，靜置， 取上清使用。（注意，現配現用）

3、操作表(biao)（在(zai) EP 管中(zhong)反應）

注(zhu)意：空白管只(zhi)需測定一次，吸取(qu)工作液時不要吸到底部(bu)沉淀，若A 測定小于 0.4，需(xu)用提取(qu)液稀釋后(hou)檢測。