注   意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的(de)樣本做預測定

研究意(yi)義：

測(ce)定對象中各(ge)(ge)種(zhong)抗氧化(hua)(hua)物(wu)質和抗氧化(hua)(hua)酶等構成總抗氧化(hua)(hua)水平。在(zai)生物(wu)學、醫學和藥學研究中常常檢測(ce)血(xue)漿、血(xue)清、唾液、尿液等各(ge)(ge)種(zhong)體液，細(xi)胞(bao)或(huo)組織等裂解液、植物(wu)或(huo)中草藥抽提液及各(ge)(ge)種(zhong)抗氧化(hua)(hua)物(wu)(antioxidant)溶液的總(zong)抗氧化(hua)能力。

測定(ding)原理：

DPPH·為穩(wen)定的(de)自(zi)由基 ，溶于甲醇，乙醇等極性溶劑中(zhong)，在(zai) 515nm 處有最大吸收。向DPPH·溶液中加入抗氧化(hua)劑(ji)時，會(hui)發生脫色反應，因此可用吸光度的變化(hua)并以 Trolox 作為對(dui)照體(ti)系量化(hua)(hua)抗(kang)氧化(hua)(hua)物(wu)質的抗(kang)氧化(hua)(hua)能力。

自(zi)備實驗用(yong)品：

恒(heng)溫水浴鍋、低溫離心機、酶標(biao)儀、96 孔板和蒸餾(liu)水。

試劑組成和配制：

提(ti)取液：液體 120mL×1 瓶，使用前預冷。

試劑一(yi)：液體 45mL×1  瓶，避光保存。

樣品的制備：

(1) 血(xue)清、血(xue)漿、唾(tuo)液(ye)或(huo)尿液(ye)等(deng)液(ye)體樣品

血漿(jiang)（制備時可(ke)以使(shi)用肝素或(huo)檸檬酸鈉抗凝(ning)，不宜使(shi)用 EDTA   抗凝(ning)）4℃，5000rpm  離心10min，取上清待(dai)測。血清、唾(tuo)液或尿液樣品(pin)直接用(yong)于測定，也可以-80℃凍存(cun)（不宜(yi)超(chao)過30 d）后(hou)再測定。

(2) 組織(zhi)樣(yang)品

按照組織質(zhi)量（g）：提(ti)取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織(zhi)，加入 1mL提取液）進行(xing)冰浴勻(yun)漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(ce)。

(3) 細(xi)胞樣(yang)品(pin)

按(an)照細胞數量（10⁴ 個）：提取液體(ti)積（mL）為 500~1000：1 的比(bi)例（建議 500 萬細(xi)胞加入1mL 提取液(ye)），冰浴超聲波破碎(sui)（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；10000g，4℃離心(xin) 10min，取上(shang)(shang)清，置冰上(shang)(shang)待測(ce)。

操作步驟：

1、酶標儀預熱 30min，調(diao)節波長至 515nm。

2、操作表（在 EP 管中反應）

注意：空白管只需測定(ding)一(yi)次，若A_測定(ding)小(xiao)于 0.2，需用提取液稀(xi)釋后檢測。