注   意 ：正式測定(ding)前務必取(qu)2-3個預期差異(yi)較大的樣本做預測定(ding)

研究(jiu)意(yi)義：

測定對(dui)象中(zhong)各(ge)種(zhong)抗(kang)氧(yang)化(hua)(hua)物(wu)質和(he)抗(kang)氧(yang)化(hua)(hua)酶等(deng)(deng)構成總抗(kang)氧(yang)化(hua)(hua)水平。在生物(wu)學(xue)、醫學(xue)和(he)藥學(xue)研究中(zhong)常常檢(jian)測血漿、血清、唾液(ye)(ye)、尿液(ye)(ye)等(deng)(deng)各(ge)種(zhong)體液(ye)(ye)，細胞或(huo)組織等(deng)(deng)裂(lie)解(jie)液(ye)(ye)、植物(wu)或(huo)中(zhong)草藥抽提(ti)液(ye)(ye)及(ji)各(ge)種(zhong)抗(kang)氧(yang)化(hua)(hua)物(wu)(antioxidant)溶(rong)液的總抗氧(yang)化能力。

測定原理：

DPPH·為穩定的自由基 ，溶(rong)(rong)于甲醇，乙(yi)醇等極性溶(rong)(rong)劑(ji)中，在 515nm 處有最(zui)大吸收(shou)。向DPPH·溶液中加入抗(kang)氧(yang)化(hua)劑時(shi)，會發生脫色反應，因此可用(yong)吸(xi)光度(du)的變化(hua)并以 Trolox 作為對(dui)照體系量化(hua)抗(kang)氧化(hua)物質的抗(kang)氧化(hua)能力。

自備實驗用品(pin)：

恒溫水浴(yu)鍋、低溫離心(xin)機(ji)、酶(mei)標儀、96 孔板(ban)和蒸餾水。

試劑組成和(he)配制：

提取液：液體(ti) 120mL×1 瓶，使用前預冷。

試(shi)劑一：液體 45mL×1  瓶，避(bi)光保存(cun)。

樣品的制備：

(1) 血清、血漿、唾液(ye)或尿(niao)液(ye)等液(ye)體(ti)樣(yang)品

血漿(jiang)（制(zhi)備時(shi)可(ke)以使用肝(gan)素或檸檬(meng)酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA   抗凝(ning)）4℃，5000rpm  離心10min，取(qu)上(shang)清待測。血清、唾(tuo)液(ye)或(huo)尿液(ye)樣品直接用(yong)于測定，也可以-80℃凍存（不宜超過30 d）后(hou)再測定。

(2) 組織樣品

按照組織(zhi)質量（g）：提取液體積(ji)(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組(zu)織，加入 1mL提取液）進行冰浴勻(yun)漿，然(ran)后 10000g，4℃離(li)心 10min，取上清，置冰上待測(ce)。

(3) 細胞樣品

按照細胞數量（10⁴ 個）：提取液(ye)體積（mL）為(wei) 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wan)細胞加入1mL 提取液），冰浴(yu)超(chao)聲波破碎（功率 200W，超聲(sheng) 3s，間隔 10s，重復 30 次）；10000g，4℃離心 10min，取(qu)上(shang)清，置冰上(shang)待(dai)測。

操作步驟(zou)：

1、酶標儀預熱 30min，調節波長至 515nm。

2、操(cao)作(zuo)表（在 EP 管中反應）

注意(yi)：空白(bai)管只需測定一次，若A_測定小于 0.2，需用提取液稀釋后檢測。