注   意 ：正(zheng)式測(ce)定(ding)前務必取2-3個預期差異較大的樣(yang)本做預測定(ding)

研究意(yi)義：

測定對象(xiang)中(zhong)各種(zhong)抗氧(yang)化(hua)物質(zhi)和抗氧(yang)化(hua)酶等(deng)(deng)構成總抗氧(yang)化(hua)水平。在生物學(xue)、醫學(xue)和藥(yao)學(xue)研究中(zhong)常(chang)常(chang)檢測血(xue)漿(jiang)、血(xue)清(qing)、唾(tuo)液、尿液等(deng)(deng)各種(zhong)體液，細胞或(huo)組(zu)織等(deng)(deng)裂解液、植物或(huo)中(zhong)草藥(yao)抽提液及各種(zhong)抗氧(yang)化(hua)物(antioxidant)溶液的總抗氧化能(neng)力。

測定原理：

DPPH·為穩定(ding)的自由基(ji) ，溶于甲醇，乙醇等極性溶劑中，在 515nm 處有最(zui)大吸(xi)收。向DPPH·溶液中加入抗氧化(hua)劑時，會發生脫色反應，因(yin)此可(ke)用吸光度的變(bian)化(hua)并以 Trolox 作為對照(zhao)體系(xi)量化抗(kang)氧化物質的抗(kang)氧化能(neng)力。

自備實驗(yan)用品：

恒溫(wen)水浴(yu)鍋、低(di)溫(wen)離心機、酶(mei)標儀、96 孔板和蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

試劑組(zu)成和配制：

提取液：液體 120mL×1 瓶，使用前(qian)預(yu)冷。

試劑一：液體 45mL×1  瓶(ping)，避(bi)光保存(cun)。

樣品(pin)的(de)制備：

(1) 血清、血漿、唾(tuo)液或(huo)尿(niao)液等液體樣品

血漿（制備時可以使用(yong)肝素或檸檬(meng)酸鈉抗凝，不(bu)宜使用(yong) EDTA   抗(kang)凝）4℃，5000rpm  離心10min，取(qu)上清待測。血清、唾(tuo)液(ye)或尿(niao)液(ye)樣(yang)品直接用于測定，也可以-80℃凍存(cun)（不宜超過30 d）后再測(ce)定。

(2) 組(zu)織樣品

按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取(qu)約 0.1g 組織，加入 1mL提取液）進行冰浴勻漿，然(ran)后 10000g，4℃離心(xin) 10min，取上清(qing)，置(zhi)冰上待(dai)測。

(3) 細胞樣品(pin)

按(an)照細胞(bao)數量（10⁴ 個）：提取(qu)液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xi)胞(bao)加入1mL 提取(qu)液(ye)），冰浴超聲波破碎(sui)（功率 200W，超(chao)聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；10000g，4℃離心 10min，取上(shang)清，置(zhi)冰上(shang)待(dai)測。

操作步驟：

1、酶(mei)標儀(yi)預熱 30min，調節波長至 515nm。

2、操(cao)作表（在 EP 管中(zhong)反應）

注意：空白(bai)管只(zhi)需測定一次，若A_測(ce)定小于 0.2，需用提取液稀釋后檢測。