【樣本要求】

1.樣本類型和采集

血清：將(jiang)(jiang)收集于(yu)血清分離管的(de)全血標本在室溫放置0.5-2小時或(huo)4℃過夜(ye)，然后(hou)1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或(huo)將(jiang)(jiang)上清置于(yu)僅(jin)供科研使(shi)用，不得用于(yu)臨床診斷。-20℃或(huo)-80℃保存(cun)，但應(ying)避免(mian)反(fan)復凍(dong)融。

血(xue)漿(jiang)：用(yong)(yong)(yong)EDTA或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)肝素作為抗凝(ning)劑(ji)采(cai)(cai)集(ji)標(biao)本，并將(jiang)標(biao)本在(zai)采(cai)(cai)集(ji)后(hou)的30分(fen)鐘(zhong)內于(yu)(yu)(yu)(yu)2-8℃ 1000×g離心(xin)(xin)15分(fen)鐘(zhong)，取(qu)(qu)上(shang)(shang)(shang)(shang)清(qing)(qing)即可(ke)檢(jian)(jian)測(ce)，或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)將(jiang)上(shang)(shang)(shang)(shang)清(qing)(qing)置于(yu)(yu)(yu)(yu)-20℃或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)-80℃保存(cun)(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)(mian)(mian)反復(fu)凍融。組織勻漿(jiang)：用(yong)(yong)(yong)預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除(chu)殘留血(xue)液(ye)(ye)（勻漿(jiang)中(zhong)裂解(jie)(jie)(jie)的紅細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)會(hui)影(ying)響測(ce)量結(jie)果），稱重后(hou)將(jiang)剪碎的組織與對應(ying)體積的PBS（一(yi)般(ban)按(an)1:9的重量體積比，比如1g的組織樣(yang)(yang)品(pin)(pin)對應(ying)9mL的PBS，具體體積可(ke)根(gen)據實驗需(xu)要適當調整，并做好記錄。推薦在(zai)PBS中(zhong)加入(ru)蛋(dan)(dan)白(bai)酶抑(yi)制劑(ji)）加入(ru)玻(bo)璃勻漿(jiang)器中(zhong)，于(yu)(yu)(yu)(yu)冰上(shang)(shang)(shang)(shang)充分(fen)研(yan)磨。為了進一(yi)步(bu)裂解(jie)(jie)(jie)組織細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，可(ke)以(yi)對勻漿(jiang)液(ye)(ye)進行超聲(sheng)破碎，或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)反復(fu)凍融。最后(hou)將(jiang)勻漿(jiang)液(ye)(ye)于(yu)(yu)(yu)(yu)5000×g離心(xin)(xin)5~10分(fen)鐘(zhong)，取(qu)(qu)上(shang)(shang)(shang)(shang)清(qing)(qing)即可(ke)檢(jian)(jian)測(ce)，或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)將(jiang)上(shang)(shang)(shang)(shang)清(qing)(qing)置于(yu)(yu)(yu)(yu)-20℃或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)-80℃保存(cun)(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)(mian)(mian)反復(fu)凍融。細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)裂解(jie)(jie)(jie)液(ye)(ye): 吸棄培(pei)養(yang)液(ye)(ye)，用(yong)(yong)(yong) PBS（0.01 M，pH 7.4）將(jiang)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)洗一(yi)遍。用(yong)(yong)(yong)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)刮(gua)刮(gua)下(xia)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)（不(bu)能用(yong)(yong)(yong)胰酶和 EDTA 處理），加入(ru) 2-5mL PBS（0.01 M，pH 7.4）。懸(xuan)浮細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)可(ke)省略。收(shou)集(ji)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)懸(xuan)液(ye)(ye)，4℃1000×g 離心(xin)(xin) 10min，棄去培(pei)養(yang)基，用(yong)(yong)(yong)預冷的 PBS 潤洗 3 次(ci)(ci)。加入(ru)適量的預冷 PBS 或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)非變性(xing)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)裂解(jie)(jie)(jie)液(ye)(ye)（臨用(yong)(yong)(yong)前加入(ru)蛋(dan)(dan)白(bai)酶抑(yi)制劑(ji)）重懸(xuan)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao),通常 6 孔板一(yi)個孔的細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)量需(xu)要 150-250μL PBS 重懸(xuan)。 將(jiang)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)放入(ru)-20℃或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)-80℃，使(shi)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)冷凍，再放室(shi)溫(wen)解(jie)(jie)(jie)凍樣(yang)(yang)品(pin)(pin)，反復(fu)凍融 3 次(ci)(ci)，使(shi)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)充分(fen)裂解(jie)(jie)(jie),也可(ke)將(jiang)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)進行超聲(sheng)破碎，以(yi)達到裂解(jie)(jie)(jie)的目的。4℃ 10000×g 離心(xin)(xin) 10min，除(chu)去細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)碎片(pian)，取(qu)(qu)上(shang)(shang)(shang)(shang)清(qing)(qing)即可(ke)檢(jian)(jian)測(ce)，或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)將(jiang)上(shang)(shang)(shang)(shang)清(qing)(qing)置于(yu)(yu)(yu)(yu)-20℃或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)-80℃保存(cun)(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)(mian)(mian)反復(fu)凍融。細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)物(wu)上(shang)(shang)(shang)(shang)清(qing)(qing)或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)其它生物(wu)標(biao)本：請1000×g離心(xin)(xin)20分(fen)鐘(zhong)，取(qu)(qu)上(shang)(shang)(shang)(shang)清(qing)(qing)即可(ke)檢(jian)(jian)測(ce)，或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)將(jiang)上(shang)(shang)(shang)(shang)清(qing)(qing)置于(yu)(yu)(yu)(yu)-20℃或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)-80℃保存(cun)(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)(mian)(mian)反復(fu)凍融。.樣(yang)(yang)本保存(cun)(cun)和穩定性(xing)樣(yang)(yang)本在(zai) 2-8℃條件下(xia)，可(ke)以(yi)儲存(cun)(cun) 72h，在(zai)- 20℃或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)-80℃可(ke)以(yi)儲存(cun)(cun)6 個月及以(yi)上(shang)(shang)(shang)(shang)。樣(yang)(yang)本收(shou)集(ji)后(hou)，不(bu)是一(yi)次(ci)(ci)檢(jian)(jian)測(ce)完，請按(an)一(yi)次(ci)(ci)用(yong)(yong)(yong)量分(fen)裝凍存(cun)(cun)，避(bi)免(mian)(mian)(mian)反復(fu)凍融