【樣本要求(qiu)】

1.樣本類(lei)型和采集

血清(qing)：將收集于(yu)血清(qing)分(fen)離(li)管的全血標本在室溫放置(zhi)0.5-2小時或4℃過夜，然(ran)后(hou)1000×g離(li)心20 分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)即可，或將上清(qing)置(zhi)于(yu)僅供科研使用(yong)(yong)，不得(de)用(yong)(yong)于(yu)臨床診斷。-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍(dong)融。

血(xue)漿：用EDTA或(huo)肝素(su)作為抗凝劑采(cai)集(ji)標本(ben)(ben)(ben)，并(bing)將(jiang)標本(ben)(ben)(ben)在采(cai)集(ji)后(hou)(hou)的(de)30分(fen)(fen)鐘(zhong)內于(yu)(yu)2-8℃ 1000×g離(li)(li)心(xin)(xin)(xin)15分(fen)(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)(shang)清(qing)(qing)(qing)即可(ke)(ke)檢(jian)測(ce)，或(huo)將(jiang)上(shang)(shang)清(qing)(qing)(qing)置(zhi)于(yu)(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)(bao)存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免反(fan)(fan)(fan)(fan)復(fu)(fu)凍(dong)(dong)(dong)融。組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)勻漿：用預冷(leng)的(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗(xi)(xi)組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)，去(qu)(qu)除(chu)殘(can)留血(xue)液（勻漿中裂(lie)解(jie)(jie)的(de)紅細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)會影響測(ce)量(liang)(liang)結果），稱(cheng)重(zhong)后(hou)(hou)將(jiang)剪碎的(de)組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)與對(dui)應(ying)體(ti)積的(de)PBS（一(yi)般按1:9的(de)重(zhong)量(liang)(liang)體(ti)積比，比如1g的(de)組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)樣(yang)品(pin)(pin)對(dui)應(ying)9mL的(de)PBS，具(ju)體(ti)體(ti)積可(ke)(ke)根據實驗需要(yao)適當調整，并(bing)做(zuo)好記錄。推(tui)薦在PBS中加(jia)入(ru)蛋白酶抑制(zhi)劑）加(jia)入(ru)玻璃勻漿器(qi)中，于(yu)(yu)冰上(shang)(shang)充分(fen)(fen)研磨。為了進(jin)一(yi)步(bu)裂(lie)解(jie)(jie)組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，可(ke)(ke)以對(dui)勻漿液進(jin)行超聲破(po)碎，或(huo)反(fan)(fan)(fan)(fan)復(fu)(fu)凍(dong)(dong)(dong)融。最后(hou)(hou)將(jiang)勻漿液于(yu)(yu)5000×g離(li)(li)心(xin)(xin)(xin)5~10分(fen)(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)(shang)清(qing)(qing)(qing)即可(ke)(ke)檢(jian)測(ce)，或(huo)將(jiang)上(shang)(shang)清(qing)(qing)(qing)置(zhi)于(yu)(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)(bao)存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免反(fan)(fan)(fan)(fan)復(fu)(fu)凍(dong)(dong)(dong)融。細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)裂(lie)解(jie)(jie)液: 吸棄培養(yang)液，用 PBS（0.01 M，pH 7.4）將(jiang)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)洗(xi)(xi)一(yi)遍。用細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)刮刮下細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)（不能(neng)用胰酶和 EDTA 處理(li)），加(jia)入(ru) 2-5mL PBS（0.01 M，pH 7.4）。懸(xuan)浮細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)可(ke)(ke)省略(lve)。收集(ji)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)懸(xuan)液，4℃1000×g 離(li)(li)心(xin)(xin)(xin) 10min，棄去(qu)(qu)培養(yang)基，用預冷(leng)的(de) PBS 潤洗(xi)(xi) 3 次(ci)。加(jia)入(ru)適量(liang)(liang)的(de)預冷(leng) PBS 或(huo)非變性細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)裂(lie)解(jie)(jie)液（臨用前加(jia)入(ru)蛋白酶抑制(zhi)劑）重(zhong)懸(xuan)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao),通常 6 孔板(ban)一(yi)個(ge)孔的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)量(liang)(liang)需要(yao) 150-250μL PBS 重(zhong)懸(xuan)。 將(jiang)樣(yang)品(pin)(pin)放入(ru)-20℃或(huo)-80℃，使樣(yang)品(pin)(pin)冷(leng)凍(dong)(dong)(dong)，再放室溫解(jie)(jie)凍(dong)(dong)(dong)樣(yang)品(pin)(pin)，反(fan)(fan)(fan)(fan)復(fu)(fu)凍(dong)(dong)(dong)融 3 次(ci)，使細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)充分(fen)(fen)裂(lie)解(jie)(jie),也(ye)可(ke)(ke)將(jiang)樣(yang)品(pin)(pin)進(jin)行超聲破(po)碎，以達到(dao)裂(lie)解(jie)(jie)的(de)目的(de)。4℃ 10000×g 離(li)(li)心(xin)(xin)(xin) 10min，除(chu)去(qu)(qu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)碎片，取(qu)上(shang)(shang)清(qing)(qing)(qing)即可(ke)(ke)檢(jian)測(ce)，或(huo)將(jiang)上(shang)(shang)清(qing)(qing)(qing)置(zhi)于(yu)(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)(bao)存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免反(fan)(fan)(fan)(fan)復(fu)(fu)凍(dong)(dong)(dong)融。細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)培養(yang)物(wu)(wu)上(shang)(shang)清(qing)(qing)(qing)或(huo)其它生物(wu)(wu)標本(ben)(ben)(ben)：請(qing)1000×g離(li)(li)心(xin)(xin)(xin)20分(fen)(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)(shang)清(qing)(qing)(qing)即可(ke)(ke)檢(jian)測(ce)，或(huo)將(jiang)上(shang)(shang)清(qing)(qing)(qing)置(zhi)于(yu)(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)(bao)存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免反(fan)(fan)(fan)(fan)復(fu)(fu)凍(dong)(dong)(dong)融。.樣(yang)本(ben)(ben)(ben)保(bao)(bao)存(cun)和穩(wen)定性樣(yang)本(ben)(ben)(ben)在 2-8℃條件下，可(ke)(ke)以儲(chu)存(cun) 72h，在- 20℃或(huo)-80℃可(ke)(ke)以儲(chu)存(cun)6 個(ge)月及以上(shang)(shang)。樣(yang)本(ben)(ben)(ben)收集(ji)后(hou)(hou)，不是一(yi)次(ci)檢(jian)測(ce)完(wan)，請(qing)按一(yi)次(ci)用量(liang)(liang)分(fen)(fen)裝凍(dong)(dong)(dong)存(cun)，避(bi)免反(fan)(fan)(fan)(fan)復(fu)(fu)凍(dong)(dong)(dong)融